雷鋒網(wǎng)按：當(dāng)基因檢測變得越來越普及，所得數(shù)據(jù)越來越多，對數(shù)據(jù)解讀的需求也由此誕生，而這就是生物信息技術(shù)的作用。本文整理自華點(diǎn)云技術(shù)總監(jiān)于偉文在雷鋒網(wǎng)硬創(chuàng)公開課上的演講，主題為如何用云計(jì)算模式實(shí)現(xiàn)生物信息分析。

于偉文，高級工程師，上海華點(diǎn)云生物科技有限公司技術(shù)總監(jiān)。是北京航空航天大學(xué)國家示范學(xué)科——“移動(dòng)云計(jì)算”專業(yè)的首批畢業(yè)生。擁有十余年 IT 領(lǐng)域從業(yè)經(jīng)驗(yàn)，主要關(guān)注于臨床、生物、金融等領(lǐng)域。作為課題負(fù)責(zé)人，曾主持過國家“十一五” 重大專項(xiàng)子課題；參與多項(xiàng)國家自然科學(xué)基金、國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室專項(xiàng)信息化建設(shè)項(xiàng)目。在Nature 子刊、SCI等權(quán)威刊物上發(fā)表學(xué)術(shù)論文10 余篇。

公開課視頻如下：

以下為雷鋒網(wǎng)整理的演講主要文字內(nèi)容。

華點(diǎn)云專注于高通量基因數(shù)據(jù)分析的公司，研發(fā)了一系列基因高通量生物分析工具，有基于NGS的數(shù)據(jù)傳輸、分析、報(bào)告、解讀為一體的云端協(xié)同分析解決方案。這次的公開課則主要講講，如何用云計(jì)算模式實(shí)現(xiàn)生物信息分析。這次公開課分四部分：

一是生物信息學(xué)發(fā)展的歷程，以及當(dāng)前面臨的挑戰(zhàn)。獲取數(shù)據(jù)的成本越來越低，數(shù)據(jù)量越來越大，現(xiàn)在的生物信息學(xué)面臨的痛點(diǎn)，包括數(shù)據(jù)傳輸、計(jì)算及安全等方面。今天主要講高性能計(jì)算的痛點(diǎn)。

二是分析NGS標(biāo)準(zhǔn)的生物信息分析的模式，中間數(shù)據(jù)處理的格式是怎么樣的。你可能知道，科研單位主要是單樣本分析，時(shí)間長且占資源。企業(yè)一般是多樣本分析，痛點(diǎn)是NGS分析流程比較復(fù)雜，分析時(shí)間長，對集成帶來壓力?，F(xiàn)在有兩種計(jì)算模式：一種是彈性計(jì)算，基本能解決八成的問題；二是分布式計(jì)算。

三是云計(jì)算模式的特點(diǎn)與優(yōu)勢。

第四部分會(huì)以我們的乳腺癌檢測產(chǎn)品為例，看如何在云端實(shí)現(xiàn)生物信息分析流程。

1953年，沃森和克里克提出了DNA 雙螺旋結(jié)構(gòu)，標(biāo)志著生物科學(xué)的發(fā)展進(jìn)入了分子生物學(xué)階段，使遺傳的研究深入到分子層次，“生命之謎”被打開，人們清楚地了解遺傳信息的構(gòu)成和傳遞的途徑。這也開啟了生物信息學(xué)的紀(jì)元，雖然當(dāng)時(shí)還沒這種叫法。

生物信息學(xué)之父是林華安，他提出了Bioinfomatics這種詞。右圖是人類基因組計(jì)算，自1990年正式實(shí)施，是生命科學(xué)的“登月計(jì)劃”，也讓生物信息學(xué)走向高潮。

人類基因組計(jì)劃中有一個(gè)關(guān)鍵人物克雷格·文特爾，到1997年時(shí)整個(gè)計(jì)劃只完成了3%，但時(shí)間和經(jīng)費(fèi)都用去了一半多。文特爾說有方法在3年內(nèi)完成基因組測序，他以一己之力單挑6國科學(xué)家，采用“鳥槍法”以更快的速度完成人類。他本想為自己的方法申請專利，但在克林頓總統(tǒng)的要求下和其它6國科學(xué)進(jìn)行了合作。

那什么叫測序？簡單來說昌通過中間的測序儀，可以產(chǎn)生ACTG這樣的數(shù)據(jù)，而生物信息學(xué)就是分析這些數(shù)據(jù)。

基因測序分為三代。

第一代測序技術(shù)的主要特點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)是測序讀長可達(dá)1000bp，準(zhǔn)確性高達(dá)99.999%，從頭測序，從頭組裝；而缺點(diǎn)是測序成本高，通量低，難以大規(guī)模的應(yīng)用。

第二代測序的特點(diǎn)：大大降低了測序成本的同時(shí)，大幅提高了測序速度，維持了高準(zhǔn)確性，但序列讀長方面起第一代測序技術(shù)則要短很多。

第三代測序的特點(diǎn)：不需要PCR，避免了PCR錯(cuò)誤的引入，讀長可達(dá)3k，且速度快。

目前第二代測序是行業(yè)主流，后面的分析也是基于第二代?？偨Y(jié)如上圖。

上圖是測序成本的趨勢。在2001年時(shí)測一個(gè)人的基因組花費(fèi)近1億美元，而2015年時(shí)只需要1000美元。

上圖左側(cè)是人基因組個(gè)數(shù)，右側(cè)表示數(shù)據(jù)量，橫坐標(biāo)是時(shí)間。圖中黑線是真實(shí)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，藍(lán)色是摩爾定律預(yù)測數(shù)據(jù)，紅線是歷史推測。可以看出，從2017年開始，每年的基因組數(shù)據(jù)會(huì)呈線性增長。

接下來看下數(shù)據(jù)量的大小。直接看圖最后的數(shù)據(jù)，用最新的測序儀，在19-40個(gè)小時(shí)即會(huì)產(chǎn)生167GB到6TB數(shù)據(jù)，這還只是一臺測序儀。

因此，當(dāng)前考慮的不是基因測序本身的成本，而是數(shù)據(jù)傳輸、存儲(chǔ)與分析的成本。目前面臨的挑戰(zhàn)主要包括（公開課主要涉及高性能計(jì)算方面）：

數(shù)據(jù)解讀

大規(guī)模的存儲(chǔ)：大規(guī)模的存儲(chǔ)：  混亂、缺乏行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)

大量的計(jì)算資源：數(shù)據(jù)量大，計(jì)算復(fù)雜，時(shí)間長、成本高昂

高效的數(shù)據(jù)傳輸

安全穩(wěn)定的運(yùn)行環(huán)境

數(shù)據(jù)壓縮，這也是行業(yè)難點(diǎn)

NGS計(jì)算的模式與挑戰(zhàn)

上圖是NGS行業(yè)通用全基因組分析流程。測序后，通過標(biāo)準(zhǔn)化的基因組流程分析，然后與對應(yīng)的數(shù)據(jù)庫比對，就能形成標(biāo)準(zhǔn)的分析報(bào)告。

而標(biāo)準(zhǔn)的基因分析流程包括：質(zhì)控，mapping，call SNP，注釋。最重要的是mapping和call SNP，這是指它們對計(jì)算要求是非常高的。

AC和Trime是質(zhì)控，當(dāng)?shù)玫綔y序數(shù)據(jù)后，通過這兩步把低質(zhì)量數(shù)據(jù)去掉。mapping是指整個(gè)染色體數(shù)據(jù)拼成一條。最后就是去找突變位點(diǎn)在哪，找到定位后即可評估是什么樣的病種，給出一個(gè)應(yīng)對措施。

接下來看看每個(gè)階段對應(yīng)的數(shù)據(jù)格式是怎么樣的。從QC到Trime都是FastQ格式，具體如上圖所示。接下來會(huì)形成FastA格式。而通過mapping會(huì)再形成bam/sam格式。sam實(shí)質(zhì)還是文本文件，只是對文件格式的定義；bam文件是對sam文件的二進(jìn)制壓縮，占用存儲(chǔ)，后續(xù)處理速度快。通過call SNP則會(huì)生成文本。

接下來以微生物組學(xué)為例看NGS數(shù)據(jù)計(jì)算特征。如上圖所示，微生物組學(xué)中，呈現(xiàn)單個(gè)樣本數(shù)據(jù)量小、樣本數(shù)量多，及單個(gè)樣本數(shù)據(jù)量大，樣本數(shù)量少等特征。同時(shí)看到，微生物組學(xué)與參考序列的比對過程中，計(jì)算量大。微生物組學(xué)全基因組數(shù)據(jù)的組裝和聚類，對內(nèi)存的消耗也很大。海量樣本微生物組學(xué)數(shù)據(jù)的比較，也需要高IO。所以可以看到，整個(gè)NGS數(shù)據(jù)是計(jì)算密集型，內(nèi)存密集型，IO交換密集型。

當(dāng)前行業(yè)生物計(jì)算的業(yè)務(wù)場景是：

1.單樣本數(shù)據(jù)量小，樣本量很大：應(yīng)該用彈性計(jì)算模式，能解決八成的需求。

2.單樣本數(shù)據(jù)量大，樣本量很?。翰捎梅植际接?jì)算模式。

3.單樣本數(shù)據(jù)量大，樣本量較大：彈性+分布式計(jì)算模式。

云計(jì)算的特點(diǎn)與優(yōu)勢

整個(gè)云計(jì)算企業(yè)主要分為IaaS、PaaS、DaaS、SaaS。在云計(jì)算下整個(gè)醫(yī)療與健康廠商的劃分如上，其中包括了各主要服務(wù)商。

云計(jì)算整個(gè)特點(diǎn)是：

成本低，以前完成一百個(gè)樣本可能需要幾萬元，現(xiàn)在已經(jīng)降到幾元了。

彈性，即可以動(dòng)態(tài)伸縮，滿足動(dòng)態(tài)的用戶增長的需要。

以及高可靠性、通用性、虛擬化和超大規(guī)模等特點(diǎn)。

站在生物信息云端

第四部分最為重要，主要關(guān)于如何用云計(jì)算解決生物信息分析中存在的問題。

首先是“單樣本數(shù)據(jù)量小，樣本量大”的業(yè)務(wù)場景云端實(shí)現(xiàn)，這主要用彈性計(jì)算來實(shí)現(xiàn)。

上圖是以乳腺癌檢測應(yīng)用為例，它基本代表整個(gè)NGS標(biāo)準(zhǔn)的分析流程。數(shù)據(jù)特點(diǎn)是單樣本100M，有100個(gè)樣本。

傳統(tǒng)SGE集群計(jì)算模式單樣本運(yùn)行時(shí)間約15分鐘，共約22小時(shí)，而我們的目標(biāo)是15分鐘全部完成。實(shí)現(xiàn)彈性計(jì)算，要要求業(yè)務(wù)需求選擇云廠商，這里只需要從IaaS上選擇即可。

先看百度云，它提供批量計(jì)算。上圖是百度技術(shù)架構(gòu)圖。第一步是先把數(shù)據(jù)傳到對象存儲(chǔ)BOS中，之后把作業(yè)投到Batch Compute計(jì)算集群里面。

再看下阿里云，它也有Batch Compute計(jì)算模式，也適用于并行批處理作業(yè)的分布式計(jì)算。AWS由于網(wǎng)絡(luò)問題，不太好用。

下面以阿里云為例，講解如何去對Rocky.pl做彈性計(jì)算。做彈性計(jì)算，是讓機(jī)房中的多臺機(jī)器同時(shí)運(yùn)行，把結(jié)果寫到指定的OSS里。我們的任務(wù)寫一個(gè)程序，快速讓它在機(jī)房創(chuàng)建一排排機(jī)器（VM1-100），每個(gè)VM運(yùn)行Rocky.pl，輸入與輸出都放到OSS上。這就是主要思路。

在寫程序前，要做四件事，一是做環(huán)境搭建，二是把現(xiàn)有測試數(shù)據(jù)傳到OSS上，三是正式寫程序，四是查看測試結(jié)果。

環(huán)境搭建第一步是創(chuàng)建虛擬機(jī)，讓它運(yùn)行rocky.pl的話，要先做鏡像。例子中搭建的是CentOS6.5，當(dāng)然這可根據(jù)需求自行決定，另外就是安裝生物信息流程包。通過鏡像可擴(kuò)展100臺機(jī)器。

第二是準(zhǔn)備開發(fā)工具。這里以Java為例，需要的環(huán)境是jdk與eclipse。

準(zhǔn)備工作完成后，要把數(shù)據(jù)傳到OSS。剛才有三個(gè)文件，首先要將它們傳到OSS。上傳方式如上圖所示，可以通過網(wǎng)頁形式，或SDK的方式。

OSS中有幾個(gè)概念。

一是bucket，即存儲(chǔ)空間，用于存儲(chǔ)對象（Object）的容器，所有的對象都必須隸屬于某個(gè)存儲(chǔ)空間?？梢岳斫獬蓋indows下的C盤、D盤。

region是指地區(qū)，根據(jù)自己所在地域決定。

頁面開發(fā)人員的SDK方式如上所示，需要輸入賬號密碼，創(chuàng)建OSS客戶端。具體細(xì)節(jié)不再詳細(xì)展開。

接下來可通過SDK和控制臺的方式查看是否上傳成功。網(wǎng)絡(luò)不穩(wěn)定的情況下可選擇斷點(diǎn)續(xù)傳。

下一步是寫一個(gè)小程序，通過封裝一步步實(shí)現(xiàn)彈性計(jì)算。做之前，要準(zhǔn)備節(jié)點(diǎn)，讓jar包中代碼使用這個(gè)節(jié)點(diǎn)，這里會(huì)用到前面準(zhǔn)備的鏡像，并配置節(jié)點(diǎn)。然后是開發(fā)jar包，分別要構(gòu)造job對象，構(gòu)造DAG對象，構(gòu)造task對象，以及OSS與節(jié)點(diǎn)的映射關(guān)系，最后封閉job的其他對象，并啟動(dòng)job。

這里有幾個(gè)名詞要解釋。

job（作業(yè)）是BatchCompute的名詞，每次分析操作都可以看成是一個(gè)作業(yè)。比如說我們要分析100個(gè)樣本數(shù)據(jù)，那么當(dāng)我們將100個(gè)樣本當(dāng)成一個(gè)整體，只需要執(zhí)行一次，那么job就是1個(gè)。如果將這100個(gè)樣本拆分成多個(gè)組，每組N個(gè)（N<100），那么就會(huì)有M個(gè)job（M=100/N）。例如每組5個(gè)樣本，總共拆分成20個(gè)組，那么job個(gè)數(shù)就是20。

DAG是directed acycline praph的縮寫，即有向無環(huán)圖，通過它可以把業(yè)務(wù)流程切分成小的節(jié)點(diǎn)。

任務(wù)（task）也是BatchCompute的名詞，是業(yè)務(wù)流程。我們可以將業(yè)務(wù)流程細(xì)分成N份，那么就可以有N個(gè)task。如果僅僅使用粗糙的業(yè)務(wù)流程，那么task設(shè)定成1即可。另外，每個(gè)job可以包含多個(gè)task，每個(gè)task單獨(dú)用1臺計(jì)算節(jié)點(diǎn)。

OSS與節(jié)點(diǎn)的映射關(guān)系，是將OSS上的數(shù)據(jù)掛載到節(jié)點(diǎn)上，以后此節(jié)點(diǎn)上的任何操作都是讀取本地目錄上的數(shù)據(jù)。這么做的好處在于減少了頻繁和OSS進(jìn)行交互，防止交互過于頻繁，掛載連接斷掉。而這種方式只需要最后關(guān)閉節(jié)點(diǎn)的時(shí)候，才和OSS交互。

原始DAG的缺點(diǎn)是，每臺計(jì)算節(jié)點(diǎn)運(yùn)算時(shí)間很短，但是等待資源時(shí)間很長。一般情況下，每個(gè)節(jié)點(diǎn)資源需要等待3-5分鐘，而計(jì)算的時(shí)間可能僅僅幾十秒。總的運(yùn)行時(shí)間可能達(dá)到20分鐘。

所以，一個(gè)想法是在一個(gè)task上運(yùn)行所有步驟。要這么做，其中的步驟會(huì)如上圖所示。

偽代碼則如上所示，具體不再詳細(xì)展開。程序非常簡單，也有python和java等各個(gè)版本。

前面講述的是一個(gè)job的運(yùn)行流程?，F(xiàn)在我們有100個(gè)樣本，每個(gè)task運(yùn)行2個(gè)樣本，那么共需要50個(gè)task，每個(gè)task對應(yīng)1個(gè)job，那么就需要50個(gè)job。測試階段，我們可以使用for循環(huán)，執(zhí)行50次。每個(gè)都運(yùn)行一次job。偽代碼如下：

for (int i = 1; i<=50; i++ ) {

      //運(yùn)行job

 }

實(shí)際應(yīng)用中，我們是通過一個(gè)調(diào)度系統(tǒng)，來判斷當(dāng)出現(xiàn)2個(gè)樣本數(shù)據(jù)時(shí)，則創(chuàng)建一個(gè)job，并啟動(dòng)job，讓這個(gè)job運(yùn)行1個(gè)task，每個(gè)task里面執(zhí)行2個(gè)樣本數(shù)據(jù)。當(dāng)有100個(gè)樣本數(shù)據(jù)時(shí)，我們會(huì)啟動(dòng)50次job。偽代碼如下：

//1.調(diào)度器發(fā)現(xiàn)有2個(gè)樣本

//2.1構(gòu)造job對象

      //2.2構(gòu)造task對象

      //2.3將2個(gè)樣本 set到task對象中

//3.創(chuàng)建job并啟動(dòng)

上圖是真實(shí)測試數(shù)據(jù)，藍(lán)色是開始時(shí)間，黃色是結(jié)束時(shí)間?？梢钥闯?，總耗時(shí)8分鐘，費(fèi)用是3元（阿里 云結(jié)果）。

用彈性計(jì)算方式，有兩個(gè)問題。頻繁對OSS讀寫，會(huì)造成OSS掛掉；另外，彈性資源有限制 ，比如阿里云限制是300臺機(jī)器。

接下來是單樣本數(shù)據(jù)量大，樣本很小的業(yè)務(wù)場景，這又應(yīng)該怎么去做呢？

再來看一下之前出現(xiàn)過的這一張圖。如果單樣本數(shù)據(jù)量大，相對它進(jìn)行加速，不適用彈性計(jì)算，必須對NGS流程中的算法進(jìn)行優(yōu)化（如各流程中所示）。

再來看看國際上，針對分布式計(jì)算的研究進(jìn)展。Spark是伯克利大學(xué)的研究結(jié)果，而它還有一個(gè)ADAM的團(tuán)隊(duì)，它專門用于生物信息計(jì)算。Google有自己的Google Genomics，而英特爾、斯坦福和微軟則是基于GATK進(jìn)行加速，不過目前還沒有成型。

國內(nèi)目前沒看到對生物信息用的算法進(jìn)行加速，我們現(xiàn)在對NGS分析流程，基于分布式計(jì)算實(shí)現(xiàn)了加速。我們在fastQC、Trime、call SNP上都有進(jìn)展。

最后介紹一下彈性分布式計(jì)算的架構(gòu)圖應(yīng)該是怎么樣的。底層是公有云，在這些IaaS上，我們會(huì)搭建一個(gè)NGS的IaaS層，把適合于HPC、Spark、Graph的集群通過轉(zhuǎn)換器封裝起來成一個(gè)計(jì)算模式，同時(shí)把OSS、SSD等封裝起來（DataHub），為上層的PaaS服務(wù)。

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